Proteinuria patologi adalah salah satu daripada tanda-tanda penyakit ginjal dan saluran kencing yang paling penting dan kekal. Penentuan kepekatan protein air kencing adalah elemen penting dan penting dalam ujian air kencing. Pengenalpastian dan penilaian kuantitatif proteinuria adalah penting bukan sahaja dalam diagnosis banyak penyakit buah pinggang primer dan sekunder, penilaian perubahan keterukan proteinuria dalam dinamika membawa maklumat mengenai proses patologi, mengenai keberkesanan rawatan. Pengesanan protein dalam air kencing, walaupun dalam jumlah surih, harus membimbangkan kemungkinan penyakit buah pinggang atau saluran kencing dan memerlukan analisis semula. Nota khas adalah ketidaksukaan penyelidikan air kencing dan, khususnya, penentuan protein air kencing tanpa mematuhi semua peraturan untuk pengumpulannya.

Semua kaedah untuk menentukan protein dalam air kencing boleh dibahagikan kepada:

• Kualiti,
• Semi-kuantitatif
• Kuantitatif.

Kaedah kualitatif

Semua sampel protein air kencing yang berkualiti tinggi adalah berdasarkan kepada keupayaan protein untuk menafikan di bawah pengaruh pelbagai faktor fizikal dan kimia. Di hadapan protein dalam sampel air kencing, ada kekeruhan atau kehilangan sedimen flocculent.

Keadaan untuk menentukan protein dalam air kencing berdasarkan tindak balas pembekuan:

1. Urin harus berasid. Urine alkali dihidu dengan beberapa (2-3) titis asid asetik (5-10%).
2. Urin harus jelas. Kekeruhan dihapuskan melalui penapis kertas. Sekiranya kekeruhan tidak hilang, tambah bakteria atau bakteria magnesia (kira-kira 1 sudu teh setiap 100 ml air kencing), goncang dan penapis.
3. Ujian kualitatif perlu dilakukan dalam dua tiub, salah satunya - kawalannya.
4. Cari kekeruhan harus berada pada latar belakang hitam dalam cahaya yang ditransmisikan.

Kaedah kualitatif untuk menentukan protein dalam air kencing termasuk:

Seperti yang ditunjukkan oleh banyak kajian, tiada satu pun daripada banyak kaedah yang diketahui untuk penentuan kualitatif protein dalam air kencing memungkinkan untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai dan boleh dihasilkan. Walaupun begitu, kebanyakan CDL di Rusia, kaedah ini digunakan secara meluas sebagai pemeriksaan - dalam air kencing dengan tindak balas kualitatif yang positif, kuantiti protein terus dilakukan. Daripada tindak balas kualitatif, ujian Geller dan sampel dengan asid sulfosalicylic lebih kerap digunakan, tetapi sampel dengan asid sulfosalicylic dianggap paling sesuai untuk mengesan proteinuria patologi. Ujian mendidih pada masa ini tidak dapat digunakan kerana kecekapan dan tempohnya.

Kaedah semi kuantitatif

Kaedah Brandberg-Roberts-Stolnikov berdasarkan ujian cincin Geller, maka kesilapan yang sama diperhatikan dengan kaedah ini seperti dengan ujian Geller.

Pada masa ini, jalur diagnostik semakin digunakan untuk menentukan protein air kencing. Untuk menentukan separuh kuantitatif protein dalam air kencing pada jalur, pewarna yang paling biasa digunakan adalah bromophenol biru dalam penampan sitrat. Kandungan protein dalam air kencing dinilai oleh intensiti warna biru-hijau, yang berkembang selepas sentuhan zon reaksi dengan air kencing. Hasilnya dinilai secara visual atau menggunakan penganalisis air kencing. Walaupun populariti yang hebat dan kelebihan jelas kaedah kimia kering (kesederhanaan, kelajuan analisis), kaedah urinalisis ini secara umum dan penentuan protein khususnya tidak tanpa kelemahan yang serius. Salah satu daripada mereka, yang membawa kepada penyelewengan maklumat diagnostik, adalah kepekaan yang lebih tinggi dari penunjuk biru bromophenol kepada albumin berbanding dengan protein lain. Dalam hal ini, jalur ujian terutamanya disesuaikan dengan pengesanan proteinuria glomerular terpilih, apabila hampir semua protein air kencing diwakili oleh albumin. Dengan perkembangan perubahan dan peralihan proteinuria glomerular terpilih kepada tidak selektif (rupa globulin dalam air kencing), keputusan penentuan protein dianggap kurang penting berbanding dengan nilai sebenar. Fakta ini menjadikannya mustahil untuk menggunakan kaedah ini untuk menentukan protein dalam air kencing untuk menilai keadaan buah pinggang (penapis glomerular) dari masa ke masa. Dalam proteinuria tubular, keputusan penentuan protein juga diremehkan. Penentuan protein menggunakan jalur diagnostik bukan penunjuk yang boleh dipercayai bagi tahap proteinuria yang rendah (sebahagian besar jalur diagnostik yang ada sekarang tidak mempunyai keupayaan untuk menangkap protein dalam air kencing pada kepekatan yang lebih rendah daripada 0.15 g / l). Keputusan negatif penentuan protein pada jalur tidak mengecualikan kehadiran dalam urin globulin, hemoglobin, uromucoid, protein Bens-Jones dan paraprotein lain.

Serpihan lendir dengan kandungan glikoprotein yang tinggi (contohnya, dalam proses keradangan dalam saluran kencing, pyuria, bacteriuria) boleh menyelesaikan zon penunjuk jalur dan menyebabkan hasil positif palsu. Hasil positif palsu mungkin juga dikaitkan dengan kepekatan urea yang tinggi. Pencahayaan yang kurang baik dan persepsi warna yang buruk boleh menyebabkan keputusan yang tidak tepat.

Dalam hal ini, penggunaan jalur diagnostik haruslah terhad kepada prosedur pemeriksaan, dan keputusan yang diperoleh dengan bantuan mereka hanya perlu dipertimbangkan.

Kaedah kuantitatif

Penentuan kuantitatif protein yang betul dalam air kencing dalam beberapa kes bukanlah satu tugas yang mudah. Kesukaran penyelesaiannya ditentukan oleh faktor-faktor berikut:

• Kandungan protein yang rendah dalam air kencing seseorang yang sihat, selalunya di ambang kepekaan kaedah yang paling dikenali;
• kehadiran dalam air kencing banyak sebatian yang boleh mengganggu tindak balas kimia;
• turun naik yang ketara dalam kandungan dan komposisi protein air kencing dalam pelbagai penyakit yang menjadikannya sukar untuk memilih bahan penentukuran yang mencukupi.

Dalam makmal klinikal, kaedah "rutin" yang dipanggil untuk menentukan protein dalam air kencing digunakan terutamanya, tetapi mereka tidak selalu memberikan hasil yang memuaskan.

Dari sudut pandangan penganalisis pakar yang bekerja di makmal, kaedah yang dimaksudkan untuk penentuan kuantitatif protein air kencing mesti memenuhi keperluan berikut:

• mempunyai hubungan linear antara penyerapan kompleks yang terbentuk semasa reaksi kimia dan kandungan protein dalam sampel dalam pelbagai kepekatan, sekali gus mengelakkan operasi tambahan dalam menyediakan sampel untuk kajian;
• haruslah sederhana, tidak memerlukan pemain yang mahir, dilakukan dengan sedikit operasi;
• mempunyai sensitiviti yang tinggi, kebolehpercayaan analitik apabila menggunakan sejumlah kecil bahan yang dikaji;
• tahan terhadap pelbagai faktor (variasi dalam komposisi sampel, kehadiran ubat, dan sebagainya);
• mempunyai kos yang boleh diterima;
• mudah disesuaikan dengan penganalisis auto;
• hasil penentuan tidak boleh bergantung kepada komposisi protein sampel air kencing.

Tiada kaedah yang diketahui pada masa ini untuk penentuan kuantitatif protein dalam air kencing boleh dikatakan sepenuhnya sebagai "standard emas."

Kaedah kuantitatif untuk menentukan protein dalam air kencing boleh dibahagikan kepada turbidimetrik dan kolorimetrik.

Kaedah turbidimetrik

Kaedah turbidimetrik termasuk:

• penentuan protein dengan sulfosalicylic acid (SSC),
• penentuan protein dengan asid trichloroacetic (THC)
• penentuan protein dengan benzethonium chloride.

Kaedah turbidimetri adalah berdasarkan kepada pengurangan keterlarutan protein air kencing kerana pembentukan penggantungan zarah-zarah yang digantung di bawah pengaruh agen pencetus. Kandungan protein dalam sampel ujian diukur sama ada oleh intensiti penyebaran cahaya, ditentukan oleh jumlah zarah-hancur cahaya (kaedah analisis nephelometric), atau oleh pengurangan fluks cahaya oleh penggantungan yang terhasil (kaedah analisis turbidimetrik).

Besarnya hamburan cahaya dalam kaedah pemendapan pengesanan protein dalam air kencing bergantung kepada banyak faktor: kelajuan pencampuran reagen, suhu campuran tindak balas, pH medium, kehadiran sebatian asing, kaedah fotometri. Pematuhan yang teliti terhadap keadaan reaksi menyumbang kepada penggantungan penggantungan yang stabil dengan saiz zarah yang berterusan dan memperoleh keputusan yang boleh dihasilkan secara relatif.

Beberapa ubat mempengaruhi keputusan kaedah turbidimetrik untuk menentukan protein dalam air kencing, yang membawa kepada apa yang dipanggil "palsu-positif" atau "palsu-negatif" hasil. Ini termasuk beberapa antibiotik (benzylpenicillin, cloxacillin, dll), bahan yang mengandung iodine radiopaque, ubat sulfa.

Kaedah turbidimetrik adalah tidak standard, sering menyebabkan keputusan yang salah, tetapi walaupun ini, mereka kini digunakan secara meluas dalam makmal kerana kos rendah dan ketersediaan reagen. Kaedah yang paling banyak digunakan di Rusia ialah penentuan protein dengan asid sulfosalicylic.

Kaedah colorimetric

Yang paling sensitif dan tepat ialah kaedah kolum metrik untuk menentukan jumlah protein air kencing, berdasarkan tindak balas protein warna tertentu.

Ini termasuk:

1. reaksi biuret,
2. Kaedah Lowry
3. kaedah berdasarkan keupayaan pelbagai pewarna untuk membentuk kompleks dengan protein:
   • Ponceau S (Ponceau S),
   • Coomassie Brilliant Blue Coomassie Brilliant Blue
   • Merah Pyrogallol.

Dari sudut pandangan pelaku, dalam kerja harian makmal dengan aliran penyelidikan yang besar, kaedah biuret tidak mencukupi disebabkan oleh banyak operasi. Pada masa yang sama, kaedah ini dicirikan oleh kebolehpercayaan analisis yang tinggi, membolehkan penentuan protein dalam pelbagai kepekatan dan mengesan albumin, globulin dan paraprotein dengan kepekaan yang setanding, sebagai akibatnya kaedah biuret dianggap sebagai rujukan dan disyorkan untuk membandingkan kaedah analisis lain untuk mengesan protein dalam air kencing. Kaedah biuret untuk menentukan protein dalam air kencing lebih baik dilakukan di makmal yang melayani jabatan nefrologi, dan digunakan dalam kes di mana keputusan penentuan menggunakan kaedah lain dipertanyakan, dan juga untuk menentukan jumlah kehilangan protein harian dalam pesakit nefrologi.

Kaedah Lowry, yang mempunyai sensitiviti yang lebih tinggi daripada kaedah biuret, menggabungkan reaksi biuret dan tindak balas Folin kepada asid amino tirosin dan tryptophan dalam molekul protein. Walaupun kepekaan yang tinggi, kaedah ini tidak selalu memberikan hasil yang boleh dipercayai apabila menentukan kandungan protein dalam air kencing. Alasannya adalah interaksi yang tidak khusus terhadap reagen Folin dengan komponen-komponen yang bukan protein air kencing (kebanyakannya asid amino, asid urik, karbohidrat). Pemisahan ini dan lain-lain komponen air kencing oleh dialisis atau pemendakan protein membolehkan seseorang untuk berjaya menggunakan kaedah ini untuk penentuan kuantitatif protein air kencing. Beberapa ubat - salisilat, chlorpromazine, tetracyclines dapat mempengaruhi kaedah ini dan memesongkan hasil kajian.

Sensitiviti yang mencukupi, kebolehan semula jadi yang baik dan kemudahan penentuan protein dengan mengikat pewarna membuat kaedah ini menjanjikan, tetapi kos tinggi reagen menghalang penggunaannya yang lebih luas di makmal. Pada masa ini, kaedah merah pyrogallol menjadi lebih biasa di Rusia.

Apabila menjalankan kajian tahap proteinuria, perlu diingat bahawa kaedah yang berbeza untuk menentukan proteinuria mempunyai kepekaan dan kekhususan yang berbeza terhadap pelbagai protein air kencing.

Berdasarkan data empirikal, disarankan untuk menentukan protein dengan dua kaedah yang berbeza dan hitung nilai sebenar menggunakan salah satu formula berikut:

proteinuria = 0.4799 B + 0.5230 L;
proteinuria = 1.5484 B - 0.4825 S;
proteinuria = 0.2167 S + 0.7579 L;
proteinuria = 1.0748 P - 0.0986 B;
proteinuria = 1.0104 P - 0.0289 S;
proteinuria = 0.8959 P + 0.0845 L;

di mana:
B - hasil pengukuran dengan Coomassie G-250;
L adalah hasil pengukuran dengan reagen Lowry;
P - hasil pengukuran dengan molybdate pyrogallol;
S adalah hasil pengukuran dengan asid sulfosalicylic.

Mengingat fluktuasi ketara dalam tahap proteinuria pada masa yang berlainan pada hari ini, serta pergantungan kepekatan protein air kencing pada diuretik, kandungannya yang berbeza dalam bahagian air kencing individu, sekarang sudah biasa bagi patologi buah pinggang untuk menilai keparahan proteinuria oleh kehilangan protein setiap hari dalam air kencing, iaitu. proteinuria harian. Ia dinyatakan dalam g / hari.

Jika tidak mungkin untuk mengumpul air kencing setiap hari, disarankan untuk menentukan kepekatan protein dan kreatinin dalam satu bahagian air kencing. Oleh kerana kadar pembebasan kreatinin pada siang hari adalah agak malar dan tidak bergantung kepada perubahan kadar kencing, nisbah kepekatan protein untuk kepekatan kreatinin adalah malar. Nisbah ini berkorelasi baik dengan perkumuhan protein harian dan oleh itu, dapat digunakan untuk menilai keparahan proteinuria. Nisbah protein / kreatinin biasa kurang daripada 0.2. Protein dan kreatinin diukur dalam g / l. Kelebihan penting kaedah menilai keparahan proteinuria dengan nisbah protein-kreatinin adalah penghapusan lengkap kesilapan yang berkaitan dengan ketidakupayaan atau pengumpulan air kencing yang tidak lengkap.

Kesusasteraan:

• O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya, Yu E. Mikhailov, "Aspek Pengesanan dan Penilaian Proteinuria Klinikal", Buku Panduan kepala CPL, No. 1, Januari 2007
• A. V. Kozlov, "Proteinuria: kaedah pengesanan", kuliah, St. Petersburg, SPbMAPO, 2000
• VL Emanuel, "Diagnosis makmal penyakit buah pinggang. Sindrom Urine ", - Buku Panduan ketua KDL, No. 12, Disember 2006
• V.I. Pupkova, L.M. Prasolov - Penentuan protein dalam air kencing dan cecair cerebrospinal. Koltsovo, 2007
• Buku panduan kaedah penyelidikan makmal klinikal. Ed. E. A. Kost. Moscow, "Perubatan", 1975

Artikel yang berkaitan

Kaedah kuantitatif untuk menentukan jumlah protein air kencing

Mana-mana sampel air kencing sesuai untuk kuantifikasi protein. Kebanyakan penyelidik memilih untuk menentukan jumlah protein dalam air kencing yang dikumpul setiap hari untuk memastikan kehilangan protein setiap hari.

Seksyen: Analisis Urin

Kaedah kuantitatif untuk penentuan jumlah protein dalam air kencing

Pada masa ini, jalur diagnostik semakin digunakan untuk menentukan protein air kencing. Untuk menentukan separuh kuantitatif protein dalam air kencing pada jalur, pewarna yang paling biasa digunakan adalah bromophenol biru dalam penampan sitrat. Kandungan protein dalam air kencing dinilai oleh intensiti warna biru-hijau, yang berkembang selepas sentuhan zon reaksi dengan air kencing.

Seksyen: Analisis Urin

Kaedah kualitatif untuk menentukan jumlah protein dalam air kencing

Semua sampel protein air kencing yang berkualiti tinggi adalah berdasarkan kepada keupayaan protein untuk menafikan di bawah pengaruh pelbagai faktor fizikal dan kimia. Di hadapan protein dalam sampel air kencing, ada kekeruhan atau kehilangan sedimen flocculent.

Seksyen: Analisis Urin

Penentuan protein air kencing dalam sampel dengan asid sulfosalicylic sebanyak 20%

Sampel dengan 20% asid sulfosalicylic merujuk kepada tindak balas kualitatif untuk penentuan protein dalam air kencing. Oleh kerana ia berdasarkan tindak balas pembekuan, air kencing yang diuji mestilah memenuhi keperluan tertentu: menjadi telus dan mempunyai reaksi asid.

Seksyen: Analisis Urin

Ujian cincin Geller

Ujian cincin Geller adalah tindak balas kualitatif untuk menentukan protein air kencing. Oleh kerana ia berdasarkan tindak balas pembekuan, air kencing yang diuji mestilah memenuhi keperluan tertentu: menjadi telus dan mempunyai reaksi asid.

Seksyen: Analisis Urin

Kaedah untuk menentukan protein dalam air kencing

Sebilangan kecil protein dalam air kencing setiap hari juga ditemui dalam individu yang sihat, bagaimanapun, kepekatan kecil sedemikian tidak dikesan dalam bahagian tunggal menggunakan kaedah yang digunakan sekarang. Kira-kira 70% daripada protein air kencing bagi seorang lelaki yang sihat untuk uromucoid, protein yang merupakan hasil daripada tisu buah pinggang; Oleh itu, perkadaran protein glomerulus dalam air kencing orang sihat boleh diabaikan dan proteinuria biasanya adalah 50-150 mg / hari, dengan kebanyakan protein air kencing sama dengan whey.

Ia diterima untuk membezakan bentuk proteinuria berikut bergantung kepada tempat asal: prerenal, yang dikaitkan dengan kerosakan protein tisu yang dipertingkatkan, hemolisis teruk; buah pinggang, kerana patologi buah pinggang, yang boleh dibahagikan kepada glomerular dan tubular; postrenal, yang berkaitan dengan patologi saluran kencing dan yang paling sering disebabkan oleh eksudan radang.

Bergantung kepada tempoh kewujudan, mereka memancarkan proteinuria yang berterusan, yang wujud selama beberapa minggu dan bahkan bertahun-tahun, dan sementara, muncul secara berkala, kadang-kadang walaupun tanpa penyakit buah pinggang, misalnya dengan demam dan mabuk yang teruk. Adalah dinasihatkan untuk membezakan antara variasi proteinuria: dengan kehilangan protein setiap hari sehingga 1 g - sederhana, dari 1 hingga 3 g - sederhana dan lebih daripada 3 g - diucapkan.

Pengesanan dalam air kencing protein dengan berat molekul yang agak besar menunjukkan ketiadaan seli penapis buah pinggang dan kerosakan yang diucapkannya. Dalam kes ini, bercakap tentang selektiviti proteinuria yang rendah. Oleh itu, pada masa ini, definisi pecahan protein air kencing telah meluas. Kaedah yang paling tepat ialah elektroforesis dalam kanji dan gel polyacrylamide.
Menurut hasil yang diperolehi oleh kaedah ini, seseorang dapat menilai selektivitas proteinuria.

Kaedah kualitatif dan kuantitatif untuk menentukan protein dalam air kencing adalah berdasarkan pembekuan dalam jumlah air kencing atau antara muka antara media (air kencing dan asid); jika ada cara untuk mengukur intensitas pembekuan, maka sampel menjadi kuantitatif.

Asid sulfosalicylic berasaskan assay:

Reagen yang diperlukan:

Larutan asid sulfosalicylic 20%.

Kursus pengajian:

Dalam 2 tiub ujian tuangkan 3 ml air kencing yang ditapis. Dalam tiub ujian tambah 6-8 tetes reagen. Pada latar belakang gelap bandingkan tiub kawalan dengan yang berpengalaman. Kekeruhan dalam tiub ujian menunjukkan kehadiran protein, sampel dianggap positif.

Jika tindak balas air kencing beralkali, maka sebelum peperiksaan itu diasamkan dengan 2-3 titis larutan asid asetik 10% larutan.

Kaedah Bersama Brandberg-Roberts-Stolnikov:

Kaedah ini didasarkan pada sampel cincin Geller, yang terdiri daripada fakta bahawa di sempadan asid nitrik dan air kencing, di hadapan protein, pembekuannya berlaku dan cincin putih muncul.

Reagen yang diperlukan:

Larutan asid nitrik 30% (ketumpatan relatif 1,2) atau reagen Larionik.
Penyediaan larutan Larva: 20-30 g natrium klorida dibubarkan dengan pemanasan dalam 100 ml air suling, yang dibenarkan untuk menyejuk, ditapis. Kepada 99 ml filtrat dituangkan 1 ml asid nitrik pekat.

Kursus pengajian:

1-2 ml asid nitrik (atau reagen asid Larionik) dicurahkan ke dalam tiub dan dengan berhati-hati, di atas dinding tiub, jumlah yang sama air kencing ditapis. Penampilan cincin putih nipis di antara dua cecair antara minit ke-2 dan ke-3 menunjukkan kehadiran protein pada kepekatan kira-kira 0.033 g / l. Sekiranya cincin muncul lebih awal daripada 2 minit selepas lapisan, air kencing harus dicairkan dengan air dan lapisan semula air kencing yang telah dicairkan. Tahap pencairan air kencing dipilih bergantung kepada jenis cincin, iaitu. lebarnya, padat dan masa penampilan. Dengan cincin seperti thread, yang muncul lebih awal 2 minit, air kencing dicairkan 2 kali, dengan lebar - 4 kali, dengan satu padat - 8 kali, dsb. Kepekatan protein dikira dengan mengalikan 0.033 dengan kadar pencairan dan dinyatakan dalam gram setiap 1 l (g / l).

Kadang-kadang cincin putih diperoleh apabila jumlah urat yang besar hadir. Berbeza dengan cincin protein, urat sedikit lebih tinggi daripada sempadan antara dua cecair dan larut apabila sedikit dipanaskan.

Penentuan kuantitatif protein dalam air kencing oleh kekeruhan, dibentuk oleh penambahan asid sulfosalicylic:

Prinsip kaedah:

Keamatan kekeruhan semasa pembekuan protein dengan asid sulfosalicylic adalah berkadar dengan kepekatannya.

Reagen yang diperlukan:

1. larutan asid sulfosalicylic 3%.

2. larutan natrium klorida 0.9%.

3. Larutan albumin standard - penyelesaian 1% (1 ml larutan yang mengandungi 10 mg albumin): 1 g albumin lyophilized (dari serum manusia atau lembu) dibubarkan dalam jumlah kecil 0,9% larutan natrium klorida dalam botol dengan kapasiti 100 ml, dan kemudian disesuaikan dengan tanda dengan penyelesaian yang sama. Reagen itu stabil dengan menambahkan 1 ml larutan natrium azida 5% (NaN3). Apabila disimpan dalam peti sejuk, reagen itu sah selama 2 bulan.

Peralatan khas - colorimeter fotoelektrik.

Kursus pengajian:

1.25 ml air kencing yang ditapis dimasukkan ke dalam tiub ujian, dibuat sehingga 5 ml dengan larutan asid sulphosalicylic 3%, dan bercampur. Selepas 5 minit, mereka diukur pada colorimeter fotoelektrik pada panjang gelombang 590-650 nm (penapis cahaya oren atau merah) terhadap kawalan dalam sel dengan panjang jalur optik 5 mm. Kawalan adalah tiub di mana 1.25 ml air kencing ditapis sehingga 5 ml larutan natrium klorida 0.9%. Pengiraan dilakukan mengikut jadual penentukuran, untuk pembinaan yang dilusi disediakan dari penyelesaian standard, seperti yang ditunjukkan dalam jadual.

Dari setiap penyelesaian yang dihasilkan, 1.25 ml diambil dan dirawat sebagai sampel percubaan.

Ketergantungan rectilinear apabila membina graf penentukuran disimpan sehingga 1 g / l. Pada kepekatan yang lebih tinggi, sampel harus dicairkan dan mengambil kira pencairan dalam pengiraan.

Keputusan positif palsu boleh diperolehi jika ada agen kontras di dalam air kencing yang mengandungi iodin organik. Oleh itu, ujian tidak boleh digunakan pada orang yang mengambil persediaan iodin; Hasil positif palsu juga mungkin disebabkan oleh persiapan sulfanilamide, dos penisilin yang besar, dan pada kepekatan tinggi dalam air kencing asid urik.

Kaedah Biuret:

Prinsip kaedah:

Ikatan peptida protein dengan garam tembaga dalam alkali C membentuk kompleks warna ungu. Protein adalah pre-precipitated dengan asid trichloroacetic.

Reagen yang diperlukan:

1. Larutan 10% asid trikloroasetik.
2. 20% penyelesaian tembaga (CuSO4 ∙ 5H2O).
3. larutan NaOH 3%.

Kursus pengajian:

Untuk 5 ml air kencing yang diambil dari jumlah harian, tambah 3 ml larutan asid trikloroasetik, disentrifugasi kepada jumlah sedimen yang berterusan. Supernatan itu disedut dengan pipet, mendakan kemudian dibubarkan dalam 5 ml larutan NaOH. 0.25 ml CuSO4 ditambah kepada larutan, campuran diaduk dan disentri. Supernatan itu difotrasikan pada panjang gelombang 540 nm dalam cuvette dengan panjang jalur optik 10 mm terhadap air sulingan. Kepekatan protein dikira dari lengkung penentukuran, sambil merancang, kepekatan protein (g / l) diplot pada paksi-y dan ketumpatan optik pada unit-unit kepupusan pada paksi abscissa. Berdasarkan kepekatan yang diperoleh, kehilangan protein setiap hari dalam urin dikira.

Menggunakan kertas penunjuk (jalur):

Protein boleh dikesan dengan menggunakan kertas penunjuk (strips) yang dihasilkan oleh "Albuphan", "Ames" (England), "Albustix", "Boehringer" (Jerman), "Comburtest"

Prinsip ini didasarkan pada fenomena yang disebut sebagai kesilapan protein beberapa penunjuk asid-asas. Bahagian penunjuk kertas itu tepu dengan penampan biru dan sitrat tetrabromophenol. Apabila kertas dibasahi, penimbal larut dan menyediakan pH yang sesuai untuk tindak balas penunjuk.

Pada 3.0-3.5 kumpulan protein amino bertindak balas dengan penunjuk dan menukar warna kuning aslinya kepada biru kehijauan, selepas itu, membandingkan dengan skala warna, adalah mungkin untuk menganggarkan kepekatan protein dalam air kencing. Prasyarat utamanya untuk jalur penunjuk yang betul adalah menyediakan pH dalam julat 3.0-3.5 untuk tindak balas yang berlaku.

Sekiranya kertas bersentuhan dengan air kencing di bawah kajian lebih lama daripada pendedahan yang ditentukan dalam arahan, buffer sitrat akan larut di dalamnya, dan kemudian penunjuk itu bertindak balas terhadap pH sebenar air kencing, iaitu. memberikan reaksi positif yang salah. Oleh sebab hakikat bahawa kapasiti penampan adalah terhad, walaupun garis panduan diikuti dalam sampel air kencing terlalu alkali (pH> 6.5), hasil positif palsu didapati, dan dalam sampel air kencing yang terlalu berasid (pH 6.5), dengan kepadatan relatif rendah air kencing dan kepekatan protein jones yang rendah.

Reagen yang diperlukan:

2 M acetate buffer pH 4.9.

Kursus pengajian:

Air kencing yang ditapis dalam jumlah 4 ml dicampur dengan 1 ml penampan dan dipanaskan selama 15 minit di dalam tab mandi air pada suhu 56 ° C. Dengan kehadiran protein Bens-Jones, penderaan ketara muncul dalam masa 2 minit, dan jika kepekatan protein Bens-Jones kurang daripada 3 g / l, sampel boleh menjadi negatif. Dalam praktiknya, ini sangat jarang, kerana sebahagian besar kepekatan protein Bens-Jones dalam air kencing adalah penting.

Dengan kepastian lengkap, protein Bens-Jones dapat dikesan oleh kajian immunoelectrophoretic menggunakan sera spesifik terhadap rantai imunoglobulin yang berat dan ringan.

Penentuan albumosis (proteosis):

Albumoses adalah produk pembelahan protein, prinsip yang didasarkan pada fakta bahawa mereka tidak melipat ketika direbus, tetapi memberikan tindak balas biuret positif dan diasinkan dengan beberapa garam, terutama amonium sulfat dan zink asetat dalam medium berasid.

Air kencing yang normal tidak mengandungi albumosis. Jejak boleh berlaku dalam air kencing biasa jika berlaku penuaan air mani. Dalam patologi, albumosis boleh berlaku di dalam air kencing semasa keadaan demam, darah dan pemindahan plasma, resorpsi exudates dan transudates, dan perpecahan tumor.

Reagen yang diperlukan:

1. Larutan natrium klorida tepu.
2. Kaunseling soda kaustik.
3. Larutan tembaga sulfat yang lemah (hampir tidak berwarna).

Kursus pengajian:

Larutan natrium klorida tepu (1/3 jumlah) ditambah kepada air kencing yang diasuransikan dengan asid asetik, direbus dan cecair panas ditapis. Albumoses masuk ke dalam filtrat, di mana kehadirannya ditentukan oleh reaksi biuret. Kepada filtrat menambah 1/2 isipadu penyelesaian pekat soda kaustik dan beberapa titisan larutan sulfat tembaga yang lemah. Dengan sampel yang positif, warna merah-ungu diperolehi.

Dengan ujian positif dengan asid sulfosalicylic, air kencing dipanaskan. Jika kekeruhan hilang dan muncul kembali apabila disejukkan, itu bermakna urin mengandungi albumoses atau badan protein Bens-Jones.

Protein dalam air kencing, ujian makmal

Kaedah untuk menentukan protein air kencing

Untuk klinik berkenaan penentuan protein kualitatif dan kuantitatif dalam air kencing.

Ujian kualitatif untuk menentukan protein air kencing
Cadangan lebih daripada 100 reaksi untuk penentuan kualitatif protein dalam air kencing. Kebanyakannya adalah berdasarkan kepada pemendakan protein oleh fizikal (pemanasan) atau bahan kimia. Kehadiran protein dibuktikan dengan penampilan kekeruhan.

Juga kepentingan adalah sampel kering warna.

Di bawah akan dijelaskan hanya yang paling penting untuk amalan sampel.

Asid Sulfosalicylic asid. Kepada beberapa mililit air kencing menambah 2-4 titik larutan 20% asid sulfosalicylic. Apabila reaksi positif muncul kekeruhan. Hasilnya dinyatakan dengan istilah: opalescence, reaksi yang positif, positif atau kuat positif. Ujian asid sulfosalicylic adalah salah satu sampel yang paling sensitif untuk membina protein dalam air kencing. Dia mendapati walaupun peningkatan yang paling tidak normal dalam protein air kencing. Terima kasih kepada teknik yang mudah, ujian ini telah menemui aplikasi yang luas.

Uji dengan aseptol. Aseptol adalah pengganti asid sulfosalicylic. Ia boleh disediakan dari bahan-bahan yang terdapat di makmal (fenol dan asid sulfurik). Sebagai reagen, penyelesaian 20% aseptol digunakan. Ujian ini dijalankan seperti berikut: dalam tiub ujian yang mengandungi 2-3 ml air kencing, tambah 0.5-1-1 ml larutan aseptol ke bahagian bawah. Sekiranya cincin putih protein tergabung ternyata di sempadan antara dua cecair, sampel adalah positif.

Ujian Geller. Di bawah beberapa mililiter air kencing, 1-2 ml asid nitrik sebanyak 30% (berat graviti spesifik 1.20) adalah asin. Sekiranya cincin putih dihasilkan di antara muka kedua-dua cecair, sampel adalah positif. Reaksi menjadi positif jika protein lebih besar daripada 3.3 mg%. Kadang-kadang cincin putih diperoleh apabila jumlah urat yang besar hadir. Berbeza dengan cincin protein, cincin urat tidak muncul di sempadan antara dua cecair, tetapi sedikit lebih tinggi. Larionova bercadang untuk menggunakan bukan asid nitrik 30% sebagai larutan 1% larutan asid nitrik dalam larutan natrium klorida tepu; Ini memberikan penjimatan yang besar dalam asid nitrik.

Sampel dengan zhelezystosinerodisty kalium dan asid asetik. Reaksi ini memungkinkan untuk mengasingkan protein serum daripada nukleoalbumin.

Jumlah air kencing yang sama dituangkan ke dalam dua tiub. Dalam salah satu daripada mereka, tambah beberapa larutan 30% larutan asid asetik. Jika kekeruhan diperoleh berbanding dengan tiub kawalan, air kencing mengandungi nucleoalbumin. Jika tiada kekeruhan muncul, kandungan kedua-dua tiub bercampur dan sekali lagi dibahagikan kepada dua bahagian. Dalam salah satu daripada dua tiub ujian, tambahkan beberapa titisan (lebihan boleh menjadikan sampel positif menjadi satu negatif) daripada larutan 10% garam darah kuning (sirap kalium ferrocyanide). Di hadapan protein whey, kekeruhan diperolehi.

Dengan air kencing tertumpu yang mengandungi asid urik dan urat yang besar, sampel dengan kalium ferrilik dan sirap dan asid asetik perlu dilakukan selepas pencairan awal (2-3 kali) air kencing dengan air. Jika tidak, kekeruhan yang disebabkan oleh asid urik boleh berlaku.

Ini amat penting dalam kajian air kencing pada bayi, yang mengandungi banyak asid urik dan urat.

Daripada sampel kualitatif untuk protein dalam air kencing, berdasarkan pemendakan protein, mereka mendapati permohonan: ujian mendidih, Esbach, Perdi, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Claudius, Corso, Kubah, Goodmann-Suzanne, Jolla, Exton, Kamlet, Kobuladze, Liliendal-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushia, dll.

Dalam menghasilkan sampel berkualiti tinggi untuk protein dalam air kencing, berdasarkan pemendapan protein, perlu mematuhi peraturan umum berikut, pelanggaran yang menyebabkan kesilapan besar dalam kajian.

1. Urin yang perlu diuji mestilah berasid. Dengan tindak balas alkali, air kencing sedikit berasid dengan asid asetik. Pengeluaran sampel dengan air kencing alkali dalam kes di mana asid digunakan sebagai reagen boleh menyebabkan peneutralan asid dan kepada hasil negatif dengan reaksi positif. Ini adalah benar terutamanya untuk ujian asid sulfosalicylic, kerana asid ditambah dalam kuantiti yang sangat kecil dan dengan mudah boleh dinetralkan.

2. Air kencing yang diperiksa hendaklah telus.

3. Sampel untuk membina protein dalam air kencing perlu dilakukan dalam dua tiub, salah satunya berfungsi sebagai kawalan. Tanpa tiub kawalan, seseorang tidak dapat melihat kekeruhan cahaya semasa tindak balas.

4. Jumlah asid tambahan dalam sampel tidak boleh terlalu besar. Sebilangan besar asid boleh menyebabkan pembentukan asidolbumin larut dan transformasi sampel positif menjadi negatif.

Oleh kerana teknik mudah mereka, sampel kering kolorimetrik sepatutnya banyak perhatian. Apabila sampel-sampel ini digunakan, kesan protein yang terdapat pada warna penunjuk dalam larutan penampan (yang disebut petunjuk ralat protein). Satu kertas penapis yang disemai dengan penyangga asid sitrik dan bromophenol biru sebagai petunjuk diserap ke dalam air kencing untuk masa yang singkat. Sampel itu positif jika ia menjadi warna biru-hijau. Membandingkan intensiti pewarna dengan piawai kertas berwarna, adalah mungkin untuk mendapatkan kesimpulan kira-kira dan kuantitatif. Kertas penunjuk dijual dalam pek dengan piawai warna yang sepadan, seperti kertas penunjuk universal.

Kaedah untuk penentuan kuantitatif protein air kencing
Banyak kaedah telah dicadangkan untuk penentuan kuantitatif protein air kencing. Kaedah kuantitatif yang tepat bagi penentuan protein dalam bahan biologi tidak digunakan secara meluas dalam penentuan protein dalam air kencing, kerana teknik yang rumit dan memakan masa. Kaedah volumetrik adalah meluas, terutama kaedah Esbach. Mereka sangat mudah, tetapi, malangnya, tidak begitu tepat. Kaedah kumpulan Brandberg-Stolnikov, yang memberikan hasil yang lebih tepat daripada kaedah volumetrik, dengan teknik yang agak mudah, juga mudah untuk klinik. Di hadapan fotometer atau nephelometer, kaedah nephelometrik juga mudah.

Kaedah Esbach. Dia dicadangkan oleh pakar perubatan Paris, Esbach pada tahun 1874. Satu tiub khas (albuminometer Esbach) dituangkan dengan air kencing dan reagen. Tiub itu dimeteraikan dengan penyumbat getah, dikacau dengan teliti (tanpa memukul!) Dan dibiarkan dalam kedudukan tegak sehingga keesokan harinya. Laporkan pembahagian, yang sampai ke lajur presipitasi protein. Bilangan yang didapati menunjukkan kandungan protein. Ia sangat penting dengan kaedah Esbach bahawa air kencing adalah berasid. Air kencing alkali boleh meneutralkan konstituen berasid reagen dan mencegah penularan protein.

Kelebihan kaedah: ia mudah dan praktikal dalam amalan.

Kelemahan: kaedah tidak tepat, hasilnya diperoleh selepas 24 - 48 jam.

Kaedah Brandberg-Stolnikov. Ia berdasarkan ujian kualiti Geller. Sampel Geller boleh digunakan untuk penentuan kuantitatif, kerana memberikan hasil positif dengan kandungan protein di atas 3.3 mg%. Ini adalah kepekatan protein utama di mana sampel menjadi negatif.

Pengubahsuaian Ehrlich dan Althausen. Saintis Soviet S. L. Ehrlich dan A. Ya Altgauzen mengubah kaedah Brandberg-Stolnikov, yang menunjukkan kemungkinan mempermudahkan penyelidikan dan menjimatkan masa dalam pengeluarannya.

Penyederhanaan pertama dikaitkan dengan masa penampilan cincin itu. Ia ditentukan tepat pada masa penampilannya, tanpa perlu mematuhi minit ke-2 dan ke-3.

Penyederhanaan kedua memungkinkan penubuhan apa jenis pembiakan perlu dilakukan. Penulis telah membuktikan bahawa pengenceran yang diperlukan dapat ditinjau lebih dekat dengan jenis cincin yang diperolehi. Mereka membezakan filamen, luas
dan cincin padat.

Daripada kaedah nepelometrik, kaedah Kingsberry dan Clark patut dicatat. 2.5 ml air kencing yang ditapis dituangkan ke dalam silinder leper yang kecil, ditambah dengan larutan asid sulfosalicylic 3% hingga 10 ml. Kacau secara teliti dan, selepas 5 minit, fotometerkan dalam 1 cm cuvette, dengan penapis kuning, menggunakan air sebagai cecair pampasan. Dengan fotometer Pulfrich, kepupusan yang ditemui, didarab dengan 2.5, memberikan jumlah protein dalam% o. Dalam kes apabila indeks kepupusan adalah lebih tinggi daripada 1.0, air kencing akan dicairkan sebanyak 2 kali, 4 kali atau lebih.

Untuk mempunyai idea yang jelas tentang jumlah protein yang dikeluarkan dalam air kencing, adalah perlu untuk menentukan bukan sahaja kepekatan mereka dalam bahagian berasingan air kencing, tetapi juga jumlah jumlah harian mereka. Untuk melakukan ini, kumpulkan air kencing pesakit selama 24 jam, mengukur volumnya dalam mililiter, dan menentukan kepekatan protein dalam sebahagian urin harian dalam g%. Jumlah protein yang dikumuhkan dalam air kencing dalam 24 jam ditentukan bergantung kepada jumlah harian air kencing dalam gram.

Kepentingan klinikal protein dalam air kencing

Air kencing manusia biasanya mengandungi sejumlah kecil protein yang tidak dapat ditentukan oleh contoh ujian protein kencing kualitatif biasa. Pengekstrakan sejumlah besar protein, di mana sampel berkualiti tinggi biasa untuk protein dalam air kencing menjadi positif - fenomena yang tidak normal, yang dipanggil proteinuria. Proteinuria adalah fisiologi hanya pada bayi baru lahir, dalam 4-10 hari pertama selepas kelahiran. Nama albuminuria, yang lazim digunakan, adalah salah, kerana bukan sahaja albumin, tetapi juga jenis protein (globulin, dll) yang lain dikumuhkan dalam air kencing.

Proteinuria, sebagai gejala diagnostik, ditemui pada tahun 1770 oleh Cotuno.

Proteinuria buah pinggang berfungsi paling penting di kalangan kanak-kanak adalah seperti berikut:

1. proteinuria fisiologi bagi bayi baru lahir. Ia berlaku pada kebanyakan bayi yang baru lahir dan tidak mempunyai kesan buruk. Ia dijelaskan oleh penapis buah pinggang yang tidak matang, kerosakan kelahiran, atau kehilangan cecair pada hari-hari pertama kehidupan. Proteinuria fisiologi hilang pada hari ke-4-10 selepas kelahiran (pada bayi pramatang kemudian). Jumlah protein adalah kecil. Ia adalah nukleoalbumin.

Albuminuria neonatal, yang bertahan lama, boleh menjadi gejala penyakit kongenital.

2. Albuminuria strok. Ia disebabkan oleh melebihi had keradangan biasa penapis buah pinggang oleh keterukan mekanikal, haba, kimia, mental dan lain-lain yang teruk - kehilangan cecair pada bayi (proteinuria dehidrasi), mandi sejuk, makanan kaya protein yang berlimpah (proteinamina protein), palpation kidney (palinase albuminuria) kerja keras fizikal, ketakutan, dll.

Albuminuria stroke kelihatan lebih mudah pada kanak-kanak pada usia muda berbanding pada kanak-kanak pada usia yang lebih tua dan pada orang dewasa, kerana buah pinggang bayi dan anak kecil lebih mudah merengsakan. Dehydration albuminuria (gangguan makan, kekurangan hidrolisis, toksikosis, cirit-birit, muntah) amat biasa pada bayi.

Albuminuria strok tidak baik. Mereka hilang sejurus selepas penghapusan sebab mereka. Selalunya leukosit, silinder dan sel darah merah kadang-kadang terdapat dalam sedimen. Protein selalunya nukleoalbumin.

3. proteinuria ortostatik. Keadaan ini adalah ciri kanak-kanak prasekolah dan usia sekolah. Ia berlaku berdasarkan gangguan vasomotor dalam bekalan darah ke buah pinggang. Lazimnya untuk albuminuria ortostatik (dengan itu namanya) adalah bahawa ia muncul hanya apabila kanak-kanak berdiri, apabila tulang belakang berada dalam posisi tuan. Dalam kedudukan terlentang, ia hilang. Nukleoalbumin dibebaskan. Dalam kes-kes ragu, anda boleh menggunakan pengalaman ortostatik, yang terdiri daripada berikut: pada waktu petang, sejam sebelum berbaring, kanak-kanak mengosongkan pundi kencing; pada waktu pagi, keluar dari katil, dia sekali lagi mengeluarkan air kencing. Air kencing ini tidak mengandungi protein. Kemudian kanak-kanak itu diletakkan di atas lututnya selama 15-30 minit dengan tongkat di belakangnya, di antara siku kedua belah tangan bengkok. Ia mewujudkan kedudukan lordosis, yang menyebabkan pelepasan protein, tanpa perubahan dalam sedimen.

Dengan albuminuria ortostatik, 8-10 g protein boleh dikeluarkan setiap hari.

Proteinuria buah pinggang organik adalah penting dalam klinikal antara proteinuria. Mereka disebabkan oleh penyakit buah pinggang organik (nefritis, nephrosis, nephrosclerosis). Proteinuria adalah salah satu daripada gejala penyakit ginjal organik yang paling penting dan paling terkenal.

1. Dalam glomerulonefritis akut dan kronik, proteinuria berlaku secara teratur. Jumlah protein adalah sederhana, dan tidak ada selari antara tahap proteinuria dan keparahan penyakit. Sebaliknya, jed kronik dan lebih teruk sering berlaku dengan jumlah protein yang lebih kecil daripada akut. Selepas nefritis akut, kadang-kadang untuk masa yang lama (tahun), sejumlah kecil protein dalam air kencing ditubuhkan, tanpa sebarang tanda patologi ("residual albuminuria"). Ia tidak boleh dilupakan bahawa "nefritis tanpa proteinuria" juga boleh berlaku. Kadang-kadang protein didapati dalam satu bahagian air kencing, dan di dalam yang lain ia tidak. Nisbah albumin ke globulin dalam nefritis akut adalah rendah, dan dalam nefritis kronik lebih tinggi.

2. Sekiranya nephrosclerosis, jumlah protein dalam air kencing tidak penting, bentuk penyakit tanpa protein dalam air kencing sering dijumpai.

3. Daripada semua penyakit buah pinggang, nefrosis berlaku dengan proteinuria yang paling ketara.

4. Sekiranya berlaku keadaan berjangkit dan beracun, proteinuria yang dikenali sebagai febrile dan toksik didapati. Ini adalah nefrosis akut, di mana jumlah protein adalah kecil. Kumpulan ini juga termasuk proteinuria di negeri-negeri yang menyerang (kejang), hipertiroidisme, penyakit kuning, invaginasi, enterocolitis, luka bakar, anemia teruk, dan lain-lain. Albuminuria ini adalah benigna dan lulus dengan cepat (albuminuria sementara).

5. Apabila darah bertakung di ginjal, albuminuria congestive yang disebut berlaku, yang merupakan ciri-ciri pesakit kardiovaskular dalam peringkat dekompensasi. Ia juga dijumpai di ascites dan tumor abdomen.

Dalam demam, albuminuria toksik dan kongestif, peningkatan ketelapan penapis buah pinggang sangat ketara. Menurut beberapa penulis, banyak proteinuria ini berlaku tanpa kerosakan organik pada parenchyma buah pinggang.

Albuminuria extrarenal biasanya disebabkan oleh kekotoran protein (rembesan, sel-sel yang dipecahkan) yang dirembes oleh saluran kencing dan organ seks yang berpenyakit. Selalunya didapati albuminuria extrarenal disebabkan oleh cystopielitis (pyuria), kurang kerap disebabkan oleh vulvovaginitis, kalkulus dan tumor saluran kencing.

Apabila albuminuria extrarenal dalam sedimen mendapati sejumlah besar leukosit dan bakteria. Elemen renal hampir tidak pernah berlaku. Jumlah protein adalah kecil. Air kencing yang ditapis atau disentrifugasi biasanya tidak memberikan contoh protein positif.

Pada orang yang pulih dari pyelitis, albuminuria hilang selepas bacteriuria dan pyuria.

Ia harus ditekankan sebagai fenomena ciri yang pada zaman kanak-kanak penyakit buah pinggang organik sangat jarang, oleh itu, proteinuria organik juga jarang berlaku. Daripada mereka didapati, terutamanya, demam dan toksik. Tidak seperti proteinuria organik, albuminuria strok sangat biasa pada kanak-kanak kecil.

Pada kanak-kanak yang lebih tua, proteinuria organik lebih kerap berfungsi. Secara umum, dengan usia proteinuria berfungsi kurang biasa, dan lebih kerap organik.

Kajian elektroforetik mengenai protein dalam air kencing

Beberapa penulis menggunakan kaedah elektroforetik untuk mengkaji protein dalam urin (uroprotein). Daripada electrophoregram yang diperolehi, jelas bahawa mereka mempunyai komposisi kualitatif yang sama dengan protein plasma. Ini menunjukkan bahawa protein dalam air kencing berasal dari protein plasma.

Penentuan kualitatif dan kuantitatif protein dalam air kencing.

Nilai normal: protein biasa dalam air kencing terkandung dalam kuantiti minimum yang tidak dikesan oleh tindak balas kualitatif biasa. Had atas norma protein dalam air kencing ialah 0.033 g / l. Jika kandungan protein lebih tinggi daripada nilai ini, maka sampel protein berkualiti tinggi menjadi positif.

Kepentingan klinikal definisi:

Penampilan protein dalam air kencing dipanggil proteinuria. Proteinuria boleh menjadi palsu dan buah pinggang. Proteinuria extrarenal boleh berada di hadapan kekotoran asal protein dari organ kemaluan (vaginitis, uretritis, dan sebagainya), manakala jumlah protein tidak penting - sehingga 0.01 g / l. Protein renal boleh berfungsi (dengan hipotermia, tenaga fizikal, demam) dan organik - dengan glomerulonephritis, pyelonephritis, nefritis, nefrosis, kegagalan buah pinggang. Dalam proteinuria buah pinggang, kandungan protein boleh dari 0.033 hingga 10-15 g / l, kadang-kadang lebih tinggi.

Prinsip kaedah: didasarkan pada fakta bahawa protein di bawah tindakan asid anorganik berkecambah (menjadi kelihatan). Tahap kekeruhan bergantung kepada jumlah protein.

Pengesanan protein dalam air kencing dengan asid sulfosalicylic sebanyak 20%.

Reagen: larutan 20% asid sulfosalicylic. Peralatan: latar belakang gelap.

1. Keperluan untuk air kencing: air kencing mestilah pH berasid (atau sedikit berasid), mesti telus, untuk tujuan ini, air kencing disentri. Air kencing alkali diasaskan kepada medium reaksi berasid yang lemah, menggunakan kertas penunjuk untuk kawalan.

2. Dalam 2 tiub ujian diameter yang sama tuangkan 2 ml air kencing yang disediakan. 1 tiub ujian - kawalan, 2 - pengalaman. Kepada tiub ujian menambah 4 titis 20% asid sulfosalicylic.

3. Hasilnya ditandakan pada latar belakang gelap.

4. Di hadapan protein, air kencing di dalam tiub ujian bertambah keruh.

Penentuan kualiti protein dalam air kencing dengan jalur ujian berkualiti tinggi.

Untuk mengenal pasti proteinuria, pelbagai jalur monotest digunakan: Albufan, Albustiks, Biofan E dan ujian politik: Triscan, Nonafan dan lain-lain.

Pengesanan protein dalam air kencing dengan kaedah Roberts - Stolnikov.

Prinsip kaedah: didasarkan pada fakta bahawa protein di bawah tindakan asid anorganik berkecambah (menjadi kelihatan). Tahap kekeruhan bergantung pada jumlah protein (iaitu ujian cincin Geller). Apabila kepekatan protein dalam air kencing adalah 0.033 g / l, pada akhir 3 minit selepas lapisan air kencing benang putih nipis muncul.

Reagen: penyelesaian 50% asid nitrik atau reaksi Roberts (98 bahagian larutan natrium klorida tepu dan 2 bahagian asid hidroklorik pekat) atau reagen daripada Larionik (98 bahagian larutan natrium klorida dan 2 bahagian asid nitrik pekat).

Peralatan: latar belakang gelap.

1. Keperluan untuk air kencing: air kencing mestilah pH berasid (atau sedikit berasid), mesti telus, untuk tujuan ini, air kencing disentri. Air kencing alkali diasaskan kepada medium reaksi berasid yang lemah, menggunakan kertas penunjuk untuk kawalan.

2. Tuang 2 ml penyelesaian 50% asid nitrik atau salah satu reagen ke dalam tiub ujian, kemudian hati-hati tuangkan jumlah urin yang disediakan di sepanjang dinding tiub dengan pipet.

3. Sampel dibiarkan selama 3 minit

4. Selepas 3 minit, laporkan hasilnya. Hasilnya ditandakan pada latar belakang gelap dalam cahaya yang ditransmisikan. Sekiranya cincin itu luas, padat, maka air kencing dicairkan dengan air suling dan berlapis lagi pada reagen.

5. Urin dicairkan sehingga selepas 3 minit cincin filamen nipis dibentuk.

6. Pengiraan kandungan protein dalam air kencing yang dihasilkan mengikut formula:

C = 0.033 g / l x darjah pencairan.

194.48.155.245 © studopedia.ru bukan pengarang bahan yang diposkan. Tetapi menyediakan kemungkinan penggunaan percuma. Adakah terdapat pelanggaran hak cipta? Tulis kepada kami | Maklumbalas.

Lumpuhkan adBlock!
dan muat semula halaman (F5)
sangat diperlukan

Pembangunan metrik kelas praktikal "Penentuan protein dalam air kencing" (1 kursus)

Pusat Latihan Modal
Moscow

Topik: Penentuan protein air kencing.

Objektif: Untuk mengkaji kajian sifat kimia urin.

Untuk mengkaji kaedah kuantitatif dan kualitatif untuk menentukan protein air kencing;

Ketahui prinsip asas bekerja dengan jalur ujian pada penganalisis automatik.

Jenis pekerjaan: praktikal (6 jam)

Pelajar perlu tahu:

Sampel kualitatif untuk penentuan protein.

Roberts - kaedah Stolnikov.

Penentuan protein 3% SSC.

Kaedah penentuan protein biuret (THU).

Nilai diagnostik penunjuk penyelidikan.

Pelajar harus dapat:

Sediakan tempat kerja untuk ujian air kencing.

Sediakan reagen, hidangan dan peralatan untuk kajian.

Untuk menentukan sifat kimia urin (protein dalam air kencing dengan kaedah kualitatif dan kuantitatif).

Bekerja dengan produk kosong (reka bentuk borang analisis).

Menerjemahkan dengan betul hasil kajian.

Bermakna untuk mencapai matlamat:

1. Bekerja dengan nota, sastera pendidikan dan khas.

2. Persiapan latihan praktikal dengan menggunakan saranan metodologi guru, pelaksanaan dan pelaksanaan kerja praktikal.

3. Bekerja dengan cara pendidikan maklumat dalam media elektronik dan kertas.

Peralatan untuk bilik belajar dan stesen kerja pejabat:

kerusi oleh bilangan pelajar;

tempat kerja guru;

perabot dan kelengkapan khusus.

Alat latihan teknikal:

komputer untuk melengkapkan tempat kerja guru dan pelajar;

peranti teknikal untuk paparan audiovisual maklumat;

bantuan mengajar audiovisual (persembahan, video latihan).

Hasil penguasaan pelajaran adalah:

Pembentukan kemahiran profesional praktikal dan pengalaman praktikal awal, termasuk kecekapan profesional (PC) dan umum (QA):

PC 1.1. Sediakan tempat kerja untuk ujian klinikal makmal.

PC 1.2. Untuk menjalankan kajian klinikal makmal mengenai bahan biologi.

PC 1.3. Catat hasil penyelidikan.

PC 1.4. Buang bahan yang digunakan, membasmi kuman dan mensterilkan barangan kaca, peralatan, dan peralatan perlindungan yang digunakan.

OK 1. Memahami sifat dan kepentingan sosial profesion masa depan mereka, menunjukkan minat yang mantap di dalamnya.

OK 2. Mengatur aktiviti anda sendiri, memilih kaedah standard dan cara melaksanakan tugas profesional, menilai keberkesanan dan kualiti mereka.

OK 6. Bekerja dalam pasukan dan pasukan, berkomunikasi dengan berkesan dengan rakan sekerja, pengurusan, pesakit.

OK 9. Untuk dipandu dalam keadaan perubahan teknologi dalam aktiviti profesional.

OK 13. Untuk menganjurkan tempat kerja selaras dengan kehendak perlindungan buruh, kebersihan industri, keselamatan berjangkit dan kebakaran.

Saya modul. Bahagian teoritis dengan unsur-unsur kerja bebas

Nombor petugas 1. Mempelajari dan menggariskan bahan kajian dalam buku kerja.

Orang yang sihat biasanya mengandungi kurang daripada 0.002 g / l dan jarang sehingga 0.012 g / l protein, dan biasanya kandungan protein air kencing ini dipanggil "dalam bentuk jejak" dan tidak dikesan oleh kaedah kimia konvensional dalam urin manusia yang sihat.

Kandungan protein dalam bahagian air kencing yang dikumpul pada masa yang berlainan hari mungkin berbeza jauh.

Protein dalam air kencing dipanggil proteinuria.

Bergantung pada kehilangan protein setiap hari, derajat proteinuria berikut dibezakan: sederhana - sehingga 1 g; sederhana - dari 1 hingga 3 g; diucapkan - lebih daripada 3 g.

Terdapat dua jenis utama proteinuria:

Proteinuria, disebabkan oleh penyakit saluran kencing;

proteinuria, dengan lesi (penyakit) buah pinggang.

Proteinuria yang berkaitan dengan proses keradangan saluran kencing, disertai dengan kemunculan dalam air kencing sejumlah besar leukosit atau eritrosit, yang, bagaimanapun, tidak menghilangkan penyerapan protein serentak dalam air kencing dari parenchyma buah pinggang kandungan protein jarang melebihi 1 g / l.

Proteinuria renal dalam kebanyakan kes dikaitkan dengan peningkatan kebolehtelapan glomeruli dan dibahagikan kepada 2 kumpulan:

Untuk proteinuria fisiologi termasuk kes-kes penampilan sementara protein dalam air kencing, tidak dikaitkan dengan penyakit:

selepas makan sejumlah besar makanan yang kaya dengan protein yang tidak denatured (daging mentah, telur mentah);

dengan kerja berotot intensif (kenaikan panjang, acara sukan);

apabila mengambil mandi atau pancuran sejuk;

dengan pengalaman emosi yang kuat;

dengan kejang epilepsi.

Membezakan orthostatic, atau youth, proteinuria, yang berlaku pada kanak-kanak dan remaja dan lulus dengan usia. Dalam hubungan diagnosis yang berbeza, adalah penting bahawa albuminuria ortostatik sering dijumpai dalam tempoh pemulihan daripada glomerulonephritis akut.

Proteinuria buah pinggang patologi boleh menjadi akibat daripada penyakit organik ginjal dan organ dan sistem lain: glomerulonephritis akut; glomerulonephritis kronik; pyelonephritis akut; pyelonephritis kronik; nefropati wanita hamil; pelbagai penyakit yang berkaitan dengan demam; kegagalan jantung kronik yang teruk; dan penyakit buah pinggang yang ringan; lipoid nephrosis; tuberkulosis buah pinggang; demam berdarah; vasculitis pendarahan; anemia teruk; tekanan darah tinggi, dsb.

Nombor petugas 2. Tulis semula dan gambarkan gambarajah kaedah makmal untuk menentukan protein dalam air kencing.

Kaedah makmal bagi penentuan protein dalam air kencing

Terdapat kaedah kualitatif dan kuantitatif untuk menentukan protein dalam air kencing, mereka berdasarkan pembekuan protein dalam jumlah air kencing atau di sempadan media (air kencing dan asid); semasa mengukur tahap pembekuan membuat sampel kuantitatif.

sampel dengan asid sulfosalicylic sebanyak 20% (standard);

Ujian cincin Geller (kini tidak digunakan);

pengesanan protein menggunakan kertas penunjuk (jalur) dan jalur ujian.

kaedah Brandberg-Roberts-Stolnikov yang bersatu;

dengan asid sulfosalicylic 3%.

Kaedah kualitatif untuk menentukan protein dalam air kencing

Nombor petugas 3. Penentuan protein di dalam air kencing menggunakan sampel standard dengan 20% asid sulfosalicylic

Prinsip kaedah: berdasarkan pembekuan protein dalam jumlah air kencing atau di antara muka (air kencing dan asid)

Hidangan, peralatan dan reagen:

20% asid sulfosalicylic (asid 2-hidroksi-5-sulfobenzoik C ₇ H ₅ 0 ₆ S).

3ml air kencing yang ditapis

2 keping tiub ujian kimia

Tiga tiub air kencing yang ditapis dimasukkan ke dalam dua tiub, 6-8 tetes asid sulfosalicylic ditambah kepada salah satu daripada mereka (berpengalaman). Pada latar belakang gelap kedua-dua tiub itu dibandingkan.

Tafsiran hasil:

Pembasmian dalam tiub ujian menunjukkan kehadiran protein dalam air kencing - sampel adalah positif.

Nota Urine alkali dihidu sebelum ujian dengan menambahkan beberapa titis penyelesaian asid asetik 10%.

Nombor petugas 4. Penentuan protein menggunakan ujian cincin Geller

Prinsip kaedah: Sampel cincin ini didasarkan pada fakta bahawa apabila asid nitrik ditambah kepada air kencing di antara muka (asid - air kencing) di hadapan protein, ia mengembang dan cincin putih muncul.

Hidangan, peralatan dan reagen:

- reagen: Larutan asid nitrik 30% (HNO 3) (d = 1,2) atau Reaktan Laryonic: 20-30 g natrium klorida (NaCl) dibubarkan dalam 100 ml air suling apabila dipanaskan, disejukkan, ditapis; 1 ml HNO 3 terkumpul ditambah kepada 99 ml filtrat.

Ke dalam tiub itu tuang 1 - 2 ml larutan 30% HNO 3 atau larutan Larionova dan perlahan-lahan lapisan jumlah air kencing yang ditapis di dinding.

Tafsiran hasil:

Penampilan di sempadan dua cecair antara minit ke-2 dan ke-3 cincin putih nipis menunjukkan kehadiran protein dalam air kencing.

Lukis skim untuk menentukan protein

Kuantiti protein

Prinsip kaedah: Sampel cincin Geller adalah berdasarkan fakta bahawa apabila asid nitrik ditambah kepada air kencing di antara muka (asid - air kencing) di hadapan protein, ia mengembang dan cincin putih muncul.

Hidangan, peralatan dan reagen:

Cecair biologi (air kencing);

Ke dalam tiub itu tuang 1 - 2 ml larutan 30% HNO 3 atau larutan Larionova dan perlahan-lahan lapisan jumlah air kencing yang ditapis di dinding.

Tafsiran hasil:

Penampilan di sempadan dua cecair antara minit ke-2 dan ke-3
cincin putih nipis menunjukkan kehadiran protein pada kepekatan kira-kira 0.033 g / l. Sekiranya cincin muncul lebih awal daripada 2 minit selepas pernafasan, air kencing harus dicairkan dengan air sulingan dan menguji semula dengan air kencing yang dicairkan. Tahap pencairan air kencing dipilih bergantung kepada jenis cincin, lebarnya, padat dan masa penampilan.

Dengan cincin seperti thread, yang muncul lebih awal 2 minit, air kencing dicairkan 2 kali, dengan lebar - 4 kali, dengan satu padat - 8 kali, dsb. Kepekatan protein dikira dengan mendarabkan pengenceran dengan 0.033 g / l.

Cincin putih boleh terbentuk apabila terdapat banyak urat; Tidak seperti protein, ia kelihatan sedikit di atas sempadan dua cecair dan larut apabila ia sedikit panas.

Nombor petugas 6. Menentukan jumlah protein dalam air kencing dengan asid sulfosalicylic 3%

Prinsip kaedah: Kepekatan protein dalam air kencing adalah berkadar dengan kekeruhan yang berlaku apabila ia menguatkan asid sulfosalicylic

Hidangan, peralatan dan reagen:

Larutan natrium klorida 0.9%;

1% larutan standard albumin - 1 g albumin lyophilized (dari serum manusia atau lembu) dibubarkan dalam sedikit 0.9% larutan NaCl dalam kuah dengan kapasiti 100 ml, dan kemudian dibuat pada tanda dengan pelarut yang sama. Reagen itu stabil dengan menambahkan 1 ml larutan natrium azida 5% (NaN 3). Apabila disimpan dalam peti sejuk, reagen stabil selama 2 bulan.

1.25 ml air kencing ditapis dimasukkan ke dalam tiub ujian, 3.75 ml larutan asid sulfosalicylic 3% ditambah dan dicampur. Selepas 5 minit, sampel dikemukakan pada PEC pada panjang gelombang 590-650 nm (penapis cahaya oren atau merah) terhadap kawalan dalam cuvette dengan panjang jalur optik 5 mm. Kawalan berfungsi sebagai sampel di mana 3.75 ml daripada larutan natrium klorida 0.9% ditambah kepada 1.25 ml air kencing. Kepekatan protein dikira mengikut graf penentukuran, untuk pembinaan yang mereka menyediakan pelarut larutan albumin standard. (lihat jadual). Daripada setiap penyelesaian yang dicairkan, 1.25 ml diambil dan dirawat sebagai sampel percubaan.

Penyediaan peleburan untuk merancang penentukuran

Penyelesaian standard, ml

0.9% larutan natrium klorida, ml

Kepekatan protein, g / l

Ketergantungan rectilinear magnitud kepupusan dan kepekatan protein dikekalkan sehingga 1 g / l. Pada kepekatan protein yang lebih tinggi, sampel harus dicairkan dan mengambil kira pencairan dalam pengiraan.

Sekiranya terdapat bahan yang mengandungi iodin dalam air kencing, hasil positif palsu dapat diperolehi. Oleh itu, ujian tidak boleh digunakan pada pesakit yang mengambil persediaan iodin atau yang telah menjalani penyelidikan menggunakan sebatian radiologi yang mengandungi iodina. Kesan positif positif J dalam kajian ini boleh disebabkan oleh pengambilan ubat sulfanilamide, dos penisilin yang besar, dan kepekatan tinggi dalam air kencing asid urik.

Lukis skim untuk menentukan protein

Nombor petugas 7. Pengesanan Bens-Jones dalam Urine

Prinsip kaedah: berdasarkan reaksi termoprecipitation

Hidangan, peralatan dan reagen:

Reagen: penyangga acetate 2M pH 4.9.

4 ml air kencing yang ditapis dicampur dengan 1 ml larutan penampan dan dipanaskan selama 15 minit di dalam tab mandi air pada 56 ° C.

Tafsiran hasil:

Dengan kehadiran protein Bens-Jones dalam air kencing, sedimen yang dituturkan muncul dalam 2 minit pertama.

Apabila kepekatan protein kurang daripada 3 g / l, sampel boleh menjadi negatif, yang jarang berlaku, kerana biasanya kepekatan protein Bens-Jones dalam air kencing sangat penting.

Pengesanan protein Bens-Jones yang paling boleh dipercayai adalah dengan curah hujan pada suhu 40-60 ° C. Walau bagaimanapun, dalam terlalu berasid (pH kurang daripada 3.0) atau terlalu alkali (pH lebih daripada 6.5) air kencing, dengan kepadatan relatif rendah air kencing dan kepekatan rendah Bens-Jones beige (kurang daripada 3 g / l), pemendapan tidak mungkin berlaku.

Lukis skim untuk menentukan protein

II modul. Kerja bebas dengan peringkat penyelidikan

Nombor petugas 1. Kajian dan menggariskan aplikasi №1 "Pengesanan protein menggunakan jalur ujian diagnostik"

- Dapatkan sampel cecair biologi (air kencing) dari guru, jumlah sampel;

- Melakukan ujian air kencing menggunakan jalur ujian diagnostik;

- Rate hasilnya (norma, patologi). Katakan punca protein dalam air kencing.

- Tuliskan hasil dalam bentuk analisis, serahkannya kepada guru.

"Pengesanan protein menggunakan jalur ujian diagnostik"

Prinsip Protein mengubah warna penunjuk yang digunakan pada jalur. Petunjuk dibungkus dalam satu set 100 jalur, yang disimpan dalam kes pensel tertutup rapat, di tempat yang sejuk dan kering.

Peraturan untuk bekerja dengan jalur ujian diagnostik

Apabila bekerja dengan jalur ujian diagnostik, anda mesti mematuhi peraturan berikut:

- menyimpan jalur ujian diagnostik dalam pek tangki tertutup rapat;

- untuk menyimpan kes-kes di tempat yang gelap, kering, sejuk pada suhu tidak melebihi 30 º, tetapi tidak di dalam peti sejuk;

- Jangan dedahkan kepada lembapan dan cahaya matahari langsung, suhu tinggi dan bahan kimia yang tidak menentu;

- dapatkan hanya beberapa jalur yang sangat diperlukan, dan segera tutup kes itu;

- Jangan sentuh zon diagnostik dengan jari anda.

Kaedah Ujian

1. Untuk kajian ini, gunakan air kencing pagi yang dikumpulkan dalam bekas air kencing plastik (atau cucian kering). Campurkan air kencing yang dihantar, tetapi jangan empang.

Apabila menggunakan pembungkusan yang diselaraskan tidak standard, residu detergen dalam bekas pengumpulan air kencing menyebabkan keputusan palsu.

2. Dari kes pensel, ambil jalur ujian.

3. Segera tutup kes dengan penutup kilang; melindungi jalur dari kelembapan.

4. Turunkan jalur kertas penunjuk selama 2-3 saat ke dalam air kencing yang diperiksa dan segera buangnya.

5. Untuk mengeluarkan kelembapan yang berlebihan dari zon diagnostik jalur, jalankannya dengan tepi yang panjang di sepanjang tepi bekas (atau bekas lain di mana air kencing dihantar) atau pasangkan tepi jalur ini untuk menapis kertas.

Tidak mustahil untuk mencuci air kencing yang berlebihan daripada zon diagnostik.

6. Selepas masa yang dinyatakan pada label kanister atau dalam arahan untuk setiap ujian, tamat tempoh, bandingkan warna zon diagnostik yang bersamaan dengan skala warna pada label kanister dengan garis-garis (piawai). Prosedur ujian ditunjukkan dalam Rajah 1-7.

7. Reaksi dinilai sebagai positif atau negatif. Atau dinyatakan secara numerik dalam g / l. (lihat lukisan №8).